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制備液相知多少

 更新時(shí)間:2021-04-15 點(diǎn)擊量:3114

 

01
色譜分析的目的:
 
分析色譜的目的,是分析出混合物中一個(gè)(或者幾個(gè))純物質(zhì)的含量;制備色譜的目的,是從混合物中得到純物質(zhì)。
為了加快分離的時(shí)間與提高分離的效率,制備色譜的的進(jìn)樣品量很大,導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負(fù)荷的相應(yīng)加大,也就必須使用加大填料的譜柱,增大制備色譜的直徑和長(zhǎng)度,使用的相對(duì)多的流動(dòng)相。然而,當(dāng)色譜柱上樣品負(fù)載加大的時(shí)候,往往導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品。制備色譜,要解決容量與柱子效果之間的矛盾,對(duì)重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟(jì)上來(lái)說(shuō)。制備色譜要爭(zhēng)取少用填料,少用溶劑,要盡可能多的得到產(chǎn)品。

 

02
樣品的前處理:
 
制備色譜柱子由于處理的樣品多,比分析柱子更容易受污染,所以,必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過(guò)濾、結(jié)晶、固相萃取等簡(jiǎn)單的分離方法,如果用得上,而且還不是很麻煩,就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。

 

03
制備色譜柱的材質(zhì)及其特點(diǎn):
 

各種規(guī)格的玻璃柱子在實(shí)驗(yàn)室里頭很容易得到,而且價(jià)格低廉,但玻璃柱子致命的弱點(diǎn)是它能承受的壓力很小,且非常容易破碎。當(dāng)由于壓力太小而導(dǎo)致流動(dòng)相流速很慢的時(shí)候,高位液面或加高壓空氣(或者氮?dú)猓┑牟捎檬且粋€(gè)簡(jiǎn)單的解決辦法。在底下加真空,也能在一定程度上解決這個(gè)問(wèn)題。

不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能,但其價(jià)格相對(duì)很貴。如果,只有很小的分離任務(wù)且經(jīng)費(fèi)也允許,選擇市面上直徑為1cm的小型制備柱。有機(jī)玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕,相對(duì)不銹鋼柱子而言,它是半透明的,可以看到液體的運(yùn)行狀態(tài),對(duì)有色的物質(zhì)其特點(diǎn)就更為突出。

 
04
固定相的選擇:
 

硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹(shù)脂 、聚酰胺、 氧化鋁、 凝膠等都可以作為色譜柱的填料。有不少文獻(xiàn)報(bào)道,對(duì)填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果,如,對(duì)硅膠進(jìn)行的硝酸銀(或緩沖液)處理。

 

05
裝柱方法的選擇:
 
根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸,采用不同的裝柱方法,往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guān)系很大,顆粒度的減少會(huì)導(dǎo)致裝柱的難度。一般來(lái)說(shuō),顆粒直徑小于20-30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊-裝填”技術(shù)適用于顆粒直徑大于25um的固定相。濕法的目的是迫使相對(duì)稀松的 固定相懸漿以高速裝入色譜柱子,從而減少空隙的形成。然而,當(dāng)柱直徑大于20mm,所加壓力為30-40bar時(shí),高壓懸漿裝填技術(shù)就變得十分復(fù)雜。為將小顆粒固定相裝入更大的制備型色譜柱,可采用柱長(zhǎng)壓縮技術(shù)。這種方法,先將固定相懸漿(或偶爾是干填充物)裝入柱中加壓,利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種:徑向壓縮和軸向壓縮。濕法裝柱需要一定的設(shè)備,在柱子填完后,應(yīng)用有柱效的測(cè)量,對(duì)柱效低的柱子應(yīng)該重填。
 
06
流動(dòng)相的選擇:
 

除了和分析色譜同樣的考慮外,在選用流動(dòng)相時(shí),要考慮色譜分離后面加有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等二次分離操作。一般來(lái)說(shuō),不宜采用高毒性溶劑,對(duì)多元溶劑要盡可能的少用。

如果產(chǎn)品中含有大量溶劑,溶劑的純度也要考慮在其中。

 

07
加樣的方法:
 

可以采用以下方法之一進(jìn)樣。-用注射器進(jìn)樣-用旋轉(zhuǎn)閥進(jìn)樣-通過(guò)六通閥進(jìn)樣-通過(guò)主泵進(jìn)樣-通過(guò)輔泵進(jìn)樣-固體上樣

 

08
泵的選用:
 

生產(chǎn)制備色譜泵的廠商很多。根據(jù)有無(wú)脈沖、能承受的大壓力、控制的精度、售后服務(wù)等來(lái)選擇泵。

 

09
檢測(cè)器的選用:
 

一般的分析池的大允許流速僅為5 mL/min 或者10mL/min。而專(zhuān)門(mén)的制備池的大允許流速可為150mL/min。有時(shí),采用旁路分離管,將少量流體導(dǎo)入分析池進(jìn)行檢測(cè),是一個(gè)不錯(cuò)的辦法,但其濃度的誤差會(huì)相對(duì)較大。

 

10
組分保留時(shí)間的估計(jì):
 

用分析柱子在同等色譜條件下(同樣的固定相和流動(dòng)相)測(cè)定保留時(shí)間后,按照單一組分的線流速(不是體積流速)一定,通過(guò)計(jì)算可以知道組分的大致保留時(shí)間區(qū)域。分析譜圖的峰形狀,對(duì)確定保留時(shí)間也有很大的參考價(jià)值。

 

11
產(chǎn)品的收集:
 

手工餾分收集費(fèi)時(shí)費(fèi)力,自動(dòng)餾分收集器有很大的方便。許多實(shí)驗(yàn)室和工廠都采用了餾分收集器。

 

12
超載、邊緣切割、中心切割、放大技術(shù)與非線性效用
 

在制備色譜中,因?yàn)闆](méi)有必要達(dá)到分析色譜那樣的分離度,可以在一定范圍內(nèi)大大加大進(jìn)樣的濃度和體積。在做分離的時(shí)候,也有一些分析色譜的時(shí)候,不能用到的技巧。因?yàn)槠P(guān)系,不在這里敘述。

 

13
柱轉(zhuǎn)換技術(shù)
 

通過(guò)接頭或者閥門(mén),實(shí)現(xiàn)柱子的簡(jiǎn)單延長(zhǎng),或者比較方便地實(shí)現(xiàn)對(duì)其中一個(gè)(或幾個(gè))組分的精制。

 

14
比較新的制備色譜技術(shù)
 

模擬移動(dòng)床可以連續(xù)進(jìn)樣,并可以利用邊緣切割效用,而且采用了柱切換技術(shù),能更好的利用溶劑和填料,已經(jīng)應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。其理論和技術(shù)也日益完善。

迎頭色譜、超臨界流體色譜、逆流色譜環(huán)形色譜、氣相制備色譜等在科研和工業(yè)生產(chǎn)中也得到了應(yīng)用。

 

相關(guān)產(chǎn)品

快速中低壓制備色譜儀系列

 
 
 

 

CombiFlash® NextGEN系列快色液相制備色譜儀可從制備純化過(guò)程中進(jìn)行自動(dòng)識(shí)別色譜尺寸和類(lèi)型,提高制備實(shí)驗(yàn)效率,無(wú)論是在提純合成化合物、天然產(chǎn)品、肽或聚合物。直觀的PeakTrak軟件可在數(shù)秒內(nèi)開(kāi)始分離。根據(jù)要純化的樣品的類(lèi)型和數(shù)量選擇正相或反相柱,允許RFID標(biāo)簽載入運(yùn)行參數(shù),確認(rèn)檢測(cè)器設(shè)置(UV, Vis, ELS和MS),按下開(kāi)始,載入樣品,即可開(kāi)始自動(dòng)工作,無(wú)需人員值守。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)隨時(shí)更改參數(shù)?當(dāng)分離實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí),依然可以修改參數(shù),包括溶劑百分比、波長(zhǎng)、流速和運(yùn)行時(shí)間等,不需要進(jìn)行重復(fù)分離。
  • 流量300ml和壓力300psi

  • 允許運(yùn)行750 g或高達(dá)1-2kg的色譜柱

  • 以較高的壓力極限純化低溶解度的樣品

  • 12"或15"智能觸摸屏

  • 更寬動(dòng)態(tài)范圍的檢測(cè)器

  • 改進(jìn)的基線校正支持使用吸收性溶劑

  • 通過(guò)簡(jiǎn)化的用戶(hù)界面更快地處理

  • 節(jié)省空間:頂部托盤(pán)可容納四個(gè)4L的瓶子

  • 改進(jìn)的梯度曲線可減少多達(dá)50%的溶劑

 

EZ Prep 中壓/高壓制備色譜一體機(jī)

 
 
 
 

EZ-1.jpg

EZ Prep制備系統(tǒng)是一種雙重功能的純化設(shè)備,提供了 FLASH 閃式和 Prep HPLC 兩種色譜模式無(wú)縫切換,靈活和性能的不妥協(xié),應(yīng)對(duì)多樣化類(lèi)型樣品分離。閃式色譜,中低壓預(yù)分離后,對(duì)于要進(jìn)一步提高純度,從高壓分離得到更高分離率和純度化合物,是非常理想的選擇,滿(mǎn)足高純度要求。高壓運(yùn)行HPLC大范圍高效液相色譜柱,高壓高流速減少運(yùn)行時(shí)間。

中壓制備液相FLASH和HPLC高壓制備液相二合一

緊湊空間設(shè)計(jì), 自動(dòng)從正相到反相溶劑的智能切換

  • FLASH中壓預(yù)純化4mg-100g

  • HPLC高壓精純化mg-g級(jí),純度達(dá)99%

  • HPLC色譜柱大直徑50mm,填料粒徑在5um以下

  • 二元梯度流速達(dá)200 mL/min,大耐壓: 3500 psi

  • UV, UV/VIS, ELSD和MS等多種檢測(cè)器可選

 

ACCQ Prep HP150 高壓制備型HPLC色譜系統(tǒng)

 
 
 

 

HP150-9.png
HP150直觀、易于使用、簡(jiǎn)單純化設(shè)計(jì)理念,用戶(hù)界面友好,消除了普通高效液相色譜系統(tǒng)中不必要的和復(fù)雜的參數(shù)設(shè)置。提高高效液相制備色譜性能和準(zhǔn)確性,提高純化樣品回收率。內(nèi)置餾分收集器和集成觸摸屏,緊湊設(shè)計(jì)節(jié)省空間,HP150系統(tǒng)技術(shù)特點(diǎn):
  • 流速1-150 mL/min開(kāi)發(fā)分析方法和制備方法

  • 操作壓力可達(dá)6000 psi

  • UV或UV/VIS基礎(chǔ)上選擇ELSD和MS檢測(cè)器

  • 一鍵生成聚焦優(yōu)化梯度

  • 純化時(shí)間小化,良好樣本回收率

 

TORRENT 大型純化制備色譜儀

 
 
 

Torrent-Gray-Temp.png?

無(wú)人值守大規(guī)模自動(dòng)分離純化,自診斷系統(tǒng)確保足夠溶劑進(jìn)行純化和廢液溢出;適合各種溶劑器皿和廢液排放,智能液位技術(shù)監(jiān)測(cè)溶劑供應(yīng)和廢液。1 L/min流速、100 psi壓力、300g純化、多功能定制系統(tǒng),滿(mǎn)足各種樣品、溶劑、餾分和廢物處理設(shè)置。大流量泵在1L/min流速即使梯度很小的情況下,可提供準(zhǔn)確可靠的、重復(fù)性高的二元梯度。
  • 性能:1000ml/min 的流速,可快速的分離高達(dá)600g的樣品。

  • 安全:安全性超過(guò)了法規(guī)的要求,標(biāo)準(zhǔn)配備了流動(dòng)相系統(tǒng)的壓力傳感器和儀器周邊環(huán)境溶劑蒸汽傳感器,確保儀器在正常情況下運(yùn)行,一旦出現(xiàn)異常及時(shí)給出報(bào)警并停機(jī)。

  • 多功能性:用戶(hù)可使用或修改默認(rèn)的參數(shù),開(kāi)發(fā)自定義的分離程序,同時(shí)所有實(shí)驗(yàn)參數(shù)均可在運(yùn)行過(guò)程中加以更改,可實(shí)時(shí)控制實(shí)驗(yàn)過(guò)程(包括點(diǎn)擊并拖動(dòng)修改梯度)。

  • 操作簡(jiǎn)便:使用Peaklrak軟件,可以非常直觀地在屏幕中了解參數(shù)。

  • 應(yīng)用范圍:可用于工藝放大、化學(xué)研發(fā)、生產(chǎn)制造等生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)。

  • 廣泛應(yīng)用于制藥、藥物化學(xué)、天然物質(zhì)、農(nóng)用化學(xué)、化妝品、香精香料等行業(yè)

 

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